Определение группы крови и резус-фактора
Алгоритм действий при определении группы крови и резус-фактора
при поступлении женщины в родильный дом
Определение группы крови системы АВ0 моноклональными антителами
Подготовить:
- сухое предметное стекло (типовую тарелочку) для определения группы крови;
- цоликлоны анти-А (розового цвета) и анти-В (синего цвета);
- две пипетки для взятия цоликлонов из флаконов;
- две стеклянные палочки для смешивания крови пациентки с цоликлонами;
- одноразовый шприц (на 5-10 мл) с иглой для взятия крови из вены пациентки;
- в стерильный лоток положить 3 шарика, смоченных спиртом, 2-3 стерильные салфетки;
- резиновый жгут для внутривенных пункций;
- сухую центрифужную пробирку, на которой стеклографом отчетливо подписать фамилию пациентки;
- бланк – направление в лабораторию, где врачом – лаборантом повторно определяется группа крови, резус принадлежность, ставится печать и подпись
Соблюдая все правила для внутривенных пункций, произвести забор крови из вены пациентки (не менее 5 мл).
- Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на планшет или пластинку по одной большой капле (0,1) под соответствующими надписями: анти-А и анти-В.
- Рядом с каплями антител наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле (0,01 мл).
- После смешивания реагентов и крови разными стеклянными палочками для анти-А и анти-В в соотношении 1:10 за реакцией агглютинации наблюдают в течение 2,5 мин.
- Чтение результатов через 5 минут при помешивании капель. (от 3-х до 5 минут)
- Результат оценивается врачом. Оценка результатов реакции агглютинации с Цоликлонами анти-А и анти-В представлена в таблице, в которую также включены результаты определения агглютининов сыворотке (плазме) доноров с помощью стандартных эритроцитов.
| Реакция исследуемых эритроцитов с цоликлонами | Исследуемая кровь принадлежит к группе | |
| анти-А | анти-В | |
| – | – | 0(I) |
| + | – | A(II) |
| – | + | B(III) |
| + | + | AB(IV) |
С целью исключения аутоагглютинации, которая может наблюдаться в пуповинной крови новорожденных, в случае установления группы крови АВ(IV) необходимо произвести контрольное исследование: одну каплю (0,1 мл) изотонического раствора хлористого натрия смешать с маленькой каплей (0,01 мл) исследуемой крови. Реакция агглютинации должна ОТСУТСТВОВАТЬ.
А.Внимательно заполнить все графы бланка – направления в лабораторию для определения группы крови и резус принадлежности с подписью врача.
В. Доставить бланк-направление и пробирку с кровью пациентки в лабораторию для тщательного определения группы крови и резус принадлежности пациентки.
Определение резус-фактора с помощью моноклонального реагента (Цоликлон анти-D Супер)
На тарелку наносят большую каплю реагента (около 0,1 мл). Рядом помещают маленькую каплю (0,01-0,05 мл) исследуемой крови и смешивают кровь с реагентом. Реакция агглютинации начинает развиваться через 10-15 сек, четко выраженная агглютинация наступает через 30-60 сек. (резус положительная, нет агглютинации – резус отрицательная). Результаты реакции учитывают через 3 мин.
Тарелку после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20-30 сек, что позволяет за это время развиться более полной крупнолепестковой агглютинации.
Экспресс-определение групп крови АВО и резус с использованием набора "Эритротест-группокарт"
Набор "Эритротест-группокарт" (ООО "Гематолог", Москва) предназначен для определения АВО и Резус (RhD) групп крови человека в лабораторных и полевых условиях. Определение проводится в реакции прямой гемагглютинации и не требует никаких вспомогательных реактивов и оборудования. В состав набора входят:
- карточка "Эритротест-группокарт";
- пипетка с дозированным объемом капли около 0,02 мл;
- стерильно упакованный скарификатор;
- палочка для смешивания крови с реагентом.
В лунках карточки находятся высушенные моноклональные реагенты анти-А, анти-В, анти-АВ и анти-D, которые немедленно растворяются при добавлении воды. Моноклональные анти-D-антитела специфично выявляют антиген RhD независимо от группы АВО. В последней лунке находится растворитель для постановки контроля на неспецифическую аутоагглютинацию.
Определение производят в нативной крови с консервантом, в крови без консерванта или крови, взятой из пальца.
- Вскрывают упаковку и достают карточку, не дотрагиваясь до лунок с рабочей поверхностью. Вписывают данные пациента, кроме группы крови.
- В каждую лунку вносят 1 каплю воды (водопроводной или дистиллированной), используя вложенную в набор пипетку. Воду наносят на пятно высушенного реагента. Нельзя допускать подсыхания капли.
- Вносят в каждую лунку маленькую каплю исследуемой крови. Кровь наносят рядом с каплей реагента, не касаясь его, чтобы избежать загрязнения одного реагента другим. Для взятия крови из пальца используют стерильный скарификатор.
- Тщательно смешивают кровь с реагентом с помощью палочки, вложенной в набор. В каждой лунке смешивание производят только новой палочкой. Использование одной палочки для перемешивания в разных лунках не допустимо, т. к. ведет к загрязнению реагентов и ошибочному определению группы крови.
- Сразу покачивают пластинку. Четкая агглютинация наступает через 10-30 с, однако окончательный результат следует учитывать через 3 мин, т.к. в случае слабых форм антигена А реакция наступает позднее, а агглютинаты мельче.
- Результат оценивают визуально (табл. 18.6). В квадраты под каждой лункой вписывают результат реакции с соответствующим реагентом (+ или -).
| Таблица 18.6. Результаты реакции в наборе "Эритротест-группокарт" и группа крови | ||||
| Анти-А | Анти-В | Анти-АВ | Анти-О | Группа крови |
| – | – | – | – | 0(I) Rh – отриц. |
| – | – | – | + | 0(I) Rh – полож. |
| + | – | + | – | А(II) Rh – отриц. |
| + | – | + | + | А(II) Rh – полож. |
| – | + | + | – | В(III) Rh – отриц. |
| – | + | + | + | В(III) Rh – полож. |
| + | + | + | – | АВ(IV)Rh – отриц. |
| + | + | + | + | АВ(IV) Rh – полож. |
Срок хранения набора "Эритротест-группокарт" – 2 года при температуре 2- 8°С. Допускается хранение в течение 1 года без холодильника, если температура не превышает 25°С. Хранение и использование незапаянных или поврежденных пакетов не допускается.
Резус-фактор [1] , или резус, Rh — одна из 36 систем групп крови, признаваемых Международным обществом трансфузиологов (ISBT). Клинически наиболее важная система после системы AB0.
Система резус-фактора состоит из групп крови определяемых 59 антигенами кодируемыми свыше 200 аллелями [2] . Наибольшее практическое значение для медицины имеют обладающие повышенными иммуногенными свойствами антигены: D, C, c, E, e. Часто используемые термины «резус-положительный» и «резус-отрицательный» относятся только, соответственно, к наличию или отсутствию антигена Rho(D), обладающего наибольшей иммуногенностью. Помимо своей роли в переливании крови, группы крови системы резус-фактора, в частности антиген Rho(D), является важной причиной гемолитической желтухи новорождённых или эритробластоза плода; для предотвращения этих заболеваний ключевым фактором является профилактика резус-конфликта. Риск резус-конфликта при беременности возникает у пар с резус-отрицательной матерью и резус-положительным отцом.
Группы крови системы резус-фактора встречаются у разных народностей и в разных регионах с разной частотой [3] [4] . Резус-положительными являются около 85 % людей европеоидной расы [5] [6] .
Содержание
Резус-фактор [ править | править код ]
В зависимости от человека, на поверхности эритроцитов может присутствовать или отсутствовать антиген Rho(D) системы резус-фактор, который является наиболее иммуногенным антигеном групп крови резус-системы. Как правило, статус обозначают суффиксом Rh+ для резус-положительной группы крови (имеется антиген Rho(D)) или резус-отрицательную группу крови (Rh-, нет антигена Rho(D)) после обозначения группы крови по системе AB0. Тем не менее, другие антигены этой системы группы крови также являются клинически значимыми. В отличие от системы групп крови AB0, активизация иммунного ответа против антигена системы резус-фактора в общем случае может иметь место только при переливании крови или плацентарном воздействии во время беременности.
Rh+ или Rh- в большинстве случаев, в том числе у реципиентов определяется по антигену Rho(D), вследствие его наибольшей антигенности из всех антигенов системы резус-фактора. Одновременно он может быть выражен в разной степени, в зависимости от экспрессии гена его кодирующего. При стандартном методе определения антигена иногда может быть и ложнотрицательный результат вызванный латентным проявлением гена (в случае D u , парциального эпитопа, Del, Rhnull). Сам антиген Rho(D) состоит из разных субъединиц Rh A , Rh B , Rh C , Rh D , отличающихся между собой, что в свою очередь может вызвать иммунный конфликт даже при попадании Rh+ крови с антигенном Rho(D) в структуре которого один тип субъединиц в Rh+ организм с антигенном Rho(D) в структуре которого другой тип субъединиц. При определении резус-фактора доноров, кроме антигена Rho(D) определяют ещё наличие антигенов rh'(C) и rh"(E), Rh- донором считаются только те, у кого отсутствуют и эти антигены, так как они хоть в менее выраженной степени, но тоже способны вызывать иммунологическую реакцию при попадании в организм в котором эти антигены отсутствуют. При наличии в организме женщины антигена Rho(D) любой степени выраженности она считается Rh+.
В отличие от системы группы крови AB0, в системе резус-фактора генами кодируются только антигены, при этом антиген представляет собой мембранный липопротеин. Антитела же появляются как иммунный ответ организма при введении крови содержащей антиген в организм человека не содержащей этот антиген, в том числе при трансплацентарном попадании антигена и относятся к IgM (при первичном резус-конфликте) и IgG (при повторных случаях).
Антиген rh'(С) встречается примерно у 70 % европиоидов, антиген hr'(c) — примерно у 80 %, rh"(E) — примерно у 30 %, антиген hr"(e) — примерно у 97 %. При этом их комбинации выявляются со следующей частотой: DCE — 15,85% , DCe — 53,2%, DcE — 14,58%, Dce — 12,36%. По данным исследований 1976 года у русских встречались следующие антигены с частотой: Rho(D) — 85,03 %, rh'(C) — 70,75 %, rh"(E) — 31,03 %, hr'(c) — 84,04 %, hr"(e) — 96,76 % [1] .
История открытий [ править | править код ]
В 1939 году доктора Филип Левин и Руфус Стетсон опубликовали в первом докладе клинические последствия непризнаваемого резус-фактора в виде гемолитической реакции на переливание крови и гемолитической желтухи новорождённых в её наиболее тяжёлой форме [7] . Было признано, что сыворотка крови описываемой в докладе женщины вступила в реакцию агглютинации с красными кровяными тельцами примерно 80 % людей известных тогда групп крови, в частности, совпадающими по системе AB0. Тогда этому не было дано никакого названия, а позже такое стали называть агглютинин. В 1940 году доктора Карл Ландштейнер и Александр Винер опубликовали доклад о сыворотке, которая также взаимодействует примерно с 85 % различных эритроцитов человека [8] . Эта сыворотка была получена путём иммунизации кроликов с эритроцитами макаки-резуса. Антиген, вызвавший иммунизацию, назвали резус-фактором «для указания на то, что при изготовлении сыворотки был использован кровь макаки резус» [9] .
Основываясь на серологическом сходстве, впоследствии резус-фактор также использовался для определения антигенов и анти-резуса для антител, обнаруживаемых у людей, подобно тому, как это ранее описано Левиным и Стетсоном. Хотя различия между двумя этими сыворотками были показаны уже в 1942 году и наглядно продемонстрированы в 1963 году, уже широко используемый термин «резус» сохранялся для клинического описания антител людей, которые отличаются от тех, что связаны с обезьянами-резусами. Этот действенный фактор, обнаруженный у макаки-резуса, был классифицирован системой антигена Ландштейнера-Винера (антиген LW, антитело анти-LW), названного в честь первооткрывателей [10] [11] .
Было признано, что резус-фактор был лишь одним в системе различных антигенов. Две различные терминологии были разработаны на основе разных моделей генетического наследования и обе все ещё используются.
Вскоре было понято клиническое значение этого антигена D с высокой степенью иммунизации. Была признана важность некоторых ключевых факторов при переливании крови, в том числе наличие надёжных диагностических тестов, а также требование учитывать вероятность появления гемолитической желтухи новорождённых, последствия переливания крови и необходимость предотвращения этого путём диспансеризации и профилактики.
Номенклатура Rh [ править | править код ]
Историческое обоснование фенотипов резус-фактора [ править | править код ]
Система резус-фактора групп крови имеет две номенклатуры: одна разработана Роналдом Фишером и Робертом Рэйсом [en] и другая Александром Винером [en] . Обе системы отражают альтернативные теории наследования. Система Фишера-Рэйса, чаще всего используемая сегодня, использует номенклатуру CDE. Эта система была основана на теории, что отдельный ген контролирует продукт каждого из соответствующих ему антигенов (например, ген D производит антиген D и так далее). Тем не менее, ген d был гипотетическим, а не реально существующим.
Система Винера использует номенклатуру Rh-Hr. Эта система основывается на теории, что было по одному гену в одиночном локусе на каждой хромосоме, каждая из которых производит несколько антигенов. По этой теории ген R1 предполагается привести к «факторам крови» Rh0, rh’ и hr’ (соответствующие современной номенклатуре антигенов D, C и E) и ген r, производящий hr’ и rh’ (соответствующие современной номенклатуре из антигенов с и e) [12] .
| по Фишеру-Рейсу | Dce | DCe | DcE | DCE | dce | dCe | dcE | dCE |
| по Винеру | Rh0 | R1 | R2 | RZ | r | r′ | r″ | rY |
Обозначение из двух теорий являются взаимозаменяемыми в пунктах сдачи крови (например, Rho(D) означает, что RhD положительно). Обозначения Винера более сложны и громоздки для повседневного использования. Поэтому теория Фишера-Рэйса, более просто объясняющая механизм, стала шире использоваться.
| Резус-принадлежность по антигену Rho(D) |
Фенотип антигенов | Генотип хромосом | |
|---|---|---|---|
| по Фишеру-Рейсу | по Винеру | ||
| Rh+ | D, C, E, c, e | Dce/DCE | R0RZ |
| Dce/dCE | R0rY | ||
| DCe/DcE | R1R2 | ||
| DCe/dcE | R1r″ | ||
| DcE/dCe | R2r′ | ||
| DCE/dce | RZr | ||
| D, C, E, c | DcE/DCE | R2RZ | |
| DcE/dCE | R2rY | ||
| DCE/dcE | RZr″ | ||
| D, C, E, e | DCe/dCE | R1rY | |
| DCE/dCe | RZr′ | ||
| DCe/DCE | R1RZ | ||
| D, C, E | DCE/DCE | RZRZ | |
| DCE/dCE | RZrY | ||
| D, C, c, e | Dce/dCe | R0r′ | |
| DCe/dce | R1r | ||
| DCe/Dce | R1R0 | ||
| D, C, e | DCe/DCe | R1R1 | |
| DCe/dCe | R1r′ | ||
| D, E, c, e | DcE/Dce | R2R0 | |
| Dce/dcE | R0r″ | ||
| DcE/dce | R2r | ||
| D, E, c | DcE/DcE | R2R2 | |
| DcE/dcE | R2r″ | ||
| D, c, e | Dce/Dce | R0R0 | |
| Dce/dce | R0r | ||
| Rh- | C, E, c, e | dce/dCE | rrY |
| dCe/dcE | r′r″ | ||
| C, E, c | dcE/dCE | r″rY | |
| C, E, e | dCe/dCE | r′rY | |
| C, E | dCE/dCE | rYrY | |
| C, c, e | dce/dCe | rr′ | |
| C, e | dCe/dCe | r′r′ | |
| E, c, e | dce/dcE | rr″ | |
| E, c | dcE/dcE | r″r″ | |
| c, e | dce/dce | rr | |
Современные данные по геному резус-фактора [ править | править код ]
С развитием молекулярной генетики и расшифровкой генома человека в конце XX — начале XXI века стало известно [13] , что структура антигена D кодируется геном RHD (англ.) русск. . При отсутствии или повреждении гена антиген не образуется, а при наличии гена антиген может как образовываться в разной степени выраженности, так и не образовываться. Образование антигена и его свойства зависят в свою очередь от гена RHAG (англ.) русск. , продуцирующего Rh-ассоциированный гликопротеин, который регулирует экспрессию гена RHD и RHCE. Ген RHCE (англ.) русск. кодирует структуру антигенов С, Е, с, е. Гены RHD и RHAG имеют большое сходство между собой по нуклеотидной последовательности и расположены в соседних локусах, частично перекрываясь. С генами и антигенами резус-фактора также ассоциированы CD47, гликофорин В, системы групп крови LW и Fy [2] . Ранее употреблявшееся обозначение антигена D u с 1992 года обозначается как D weak (частичный антиген) и выделяют около 80 его вариантов [14] [15] .
Группа крови (АВ0), Резус-фактор (Rh-фактор) – лабораторные исследования, которые позволяют определить группу крови по системе АВ0 и оценить резус-принадлежность человека.
Какие бывают группы крови?
Различия между людьми по группам крови — это различия по составу определенных антигенов и антител. Основная система классификации крови – система AB0 (читается – а, б, ноль). Группы кpoви обозначают по наличию или отсутствию определенного типа «склеивающего» фактора (агглютиногена):
0 (I) — 1-я группа крови
А (II) — 2-я группа крови
В (III) — 3-я группа крови
АВ (IV) — 4-я группа крови
Что такое резус фактор?
Резус-фактор представляет собой антиген (белок), который находится в эритроцитах. Наличие резус-фактора не зависит от групповой принадлежности по системе АВ0, не изменяется в течение жизни и не зависит от внешних факторов. Примерно 80-85% людей имеют его и соответственно являются резус-положительными. Те же, у кого его нет – резус-отрицательными.
Какие существуют показания к назначению анализа на группу крови и резус-фактор?
1. определение совместимости для переливания крови;
2. гемолитическая болезнь новорожденных (выявление несовместимости крови матери и плода по системе АВ 0);
3. предоперационная подготовка;
4. беременность (подготовка и наблюдение в динамике беременных с отрицательным резус-фактором).
В какой форме выдается результат анализа на группу крови и резус фактор?
· 0 (I) – первая группа,
· A (II) – вторая группа,
· B (III) – третья группа,
· AB (IV) – четвертая группа крови.
Rh + (положительная) или Rh – (отрицательная).
Определение группы крови.
Определение группы крови по системе АВ0 (стандартная методика).
1. Исследование проводится при помощи двух серий стандартных гемагглютинирующих сывороток (I -сыворотка – этикетка бесцветная, II – синяя, III – красная, IV – ярко-желтая) на подписанной (фамилия больного) фарфоровой пластинке или тарелке.
2. Соотношение объема исследованной крови и сыворотки должно быть 1:10.
3. Исследование можно производить при температуре воздуха от 15 до 25 0 С.
4. Пластинку осторожно покачивают. По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин, в капли добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия. Результат читают через 5 мин:
1) I группа крови – агглютинации нет ни в одной капле;
2) II группа – стандартные сыворотки I и III групп агглютинируют эритроциты, а с сывороткой II группы агглютинация не наступает;
3) III группа – стандартные сыворотки I и II групп дают положительную реакцию, а сыворотка III группы – отрицательную;
4) IV группа – стандартные сыворотки всех трех групп вызывают агглютинацию. Однако для окончательного заключения необходимо провести контрольное исследование на специфичность реакции со стандартной гемагглютинирующей сывороткой IV группы.
Определение группы крови по системе АВО (экспресс-методика).
1. Исследование проводят двумя моноклональными сыворотками: анти-А (розового цвета) и анти-В(бирюзового цвета).
2. Реакция проводится на фарфоровой пластинке при обычном температурном режиме.
3. Наблюдают при покачивании в течение 3 мин.
Результат читается следующим образом:
1) с сывороткой анти-А агглютинации нет, а с анти-В есть – исследуемая кровь В (III);
2) в капле с сывороткой анти-А наступила агглютинация, с анти-В нет – исследуемая кровь А (II);
3) агглютинация наступила с обеими сыворотками – исследуемая кровь АВ (IV);
4) агглютинация не наступила в обеих каплях – кровь 0 (I);
Определение Rh-фактора крови.
(с использованием универсального реагента антирезус)
1. На дно пробирки помещают 1 каплю исследуемой крови и 1 каплю стандартного реагента и встряхивают.
2. Кладут пробирку на горизонтальную поверхность и «катают» ладонью не менее 3 мин, чтобы содержимое растекалось по стенкам
3. Добавляют 2-3 мл физраствора, закрывают пробирку пробкой и 2-3 раза спокойно переворачивают.
Оценка результата: на фоне света, если видны крупные хлопья – произошла агглютинация (резус-положительная кровь), если в пробирке равномерная розовая жидкость без хлопьев – агглютинации нет (резус-отрицательная кровь)
Запись в историю болезни результата исследования:
1. Определение группы крови проводится двумя независимыми врачами (одно исследование – на отделении, второе – в кабинете трансфузионной терапии)
2. Если результат совпадает, он вписывается в титульный лист истории болезни ОБЯЗАТЕЛЬНО ВСЕ СЛОВАМИ (пример: резус-положительная, НО НЕ Rh+), ставится подпись врача и дата исследования.
Определение на индивидуальную резус-совместимость крови.
Ый способ.
На чашку Петри наносят 2-3 капли сыворотки больного и в 10 раз меньший объем донорской крови. После перемешивания капли чашку помещают в водяную баню при температуре 46-48 0 С на 10 мин. Если агглютинации нет, то кровь совместима и ее можно переливать.
Ой способ.
Она проводится в пробирке без подогрева в течение 5 мин в следующей последовательности:
а) внесите на дно пробирки пастеровой пипеткой 2 капли сыворотки реципиента, 1 каплю крови донора и 1 каплю 33% раствора полиглюкина;
б) перемешайте полученную в пробирке смесь и, наклоняя пробирку до горизонтального положения, поворачивайте ее таким образом, чтобы содержимое растекалось по стенкам пробирки в нижней ее трети;
в) по истечении 5 мин долейте в пробирку 2-3 мл изотонического раствора хлорида натрия и перемешайте содержимое путем 2-3-кратного переворачивания пробирки (не взбалтывать!).
Наличие агглютинации эритроцитов на фоне просветленной или полностью обесцвеченной жидкости указывает на то, что кровь донора несовместима с кровью больного и не может быть ему перелита.
Равномерное окрашивание содержимого пробирки без признаков агглютинации эритроцитов свидетельствует о совместимости крови донора с кровью больного.
Совместимость по АВО-системе.
1. На пластинку или тарелку наносят 2-3 капли сыворотки больного и туда же добавляют каплю крови донора, чтобы соотношение их было 10:1.
2. Пластинку слегка покачивают, наблюдая за ходом реакции 3 мин. Добавляют каплю физраствора и наблюдают еще 2 мин.
Если появилась агглютинация, то кровь несовместима и переливать ее нельзя.
Дата добавления: 2016-04-11 ; просмотров: 993 ; ЗАКАЗАТЬ НАПИСАНИЕ РАБОТЫ
Загрузка ...