Правила определения группы крови и резус фактора

Определение группы крови и резус-фактора

Алгоритм действий при определении группы крови и резус-фактора
при поступлении женщины в родильный дом

Определение группы крови системы АВ0 моноклональными антителами

Подготовить:

• сухое предметное стекло (типовую тарелочку) для определения группы крови;
• цоликлоны анти-А (розового цвета) и анти-В (синего цвета);
• две пипетки для взятия цоликлонов из флаконов;
• две стеклянные палочки для смешивания крови пациентки с цоликлонами;
• одноразовый шприц (на 5-10 мл) с иглой для взятия крови из вены пациентки;
• в стерильный лоток положить 3 шарика, смоченных спиртом, 2-3 стерильные салфетки;
• резиновый жгут для внутривенных пункций;
• сухую центрифужную пробирку, на которой стеклографом отчетливо подписать фамилию пациентки;
• бланк – направление в лабораторию, где врачом – лаборантом повторно определяется группа крови, резус принадлежность, ставится печать и подпись

Соблюдая все правила для внутривенных пункций, произвести забор крови из вены пациентки (не менее 5 мл).

• Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на планшет или пластинку по одной большой капле (0,1) под соответствующими надписями: анти-А и анти-В.
• Рядом с каплями антител наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле (0,01 мл).
• После смешивания реагентов и крови разными стеклянными палочками для анти-А и анти-В в соотношении 1:10 за реакцией агглютинации наблюдают в течение 2,5 мин.
• Чтение результатов через 5 минут при помешивании капель. (от 3-х до 5 минут)
• Результат оценивается врачом. Оценка результатов реакции агглютинации с Цоликлонами анти-А и анти-В представлена в таблице, в которую также включены результаты определения агглютининов сыворотке (плазме) доноров с помощью стандартных эритроцитов.

Реакция исследуемых эритроцитов с цоликлонами		Исследуемая кровь принадлежит к группе
анти-А	анти-В
–	–	0(I)
+	–	A(II)
–	+	B(III)
+	+	AB(IV)

С целью исключения аутоагглютинации, которая может наблюдаться в пуповинной крови новорожденных, в случае установления группы крови АВ(IV) необходимо произвести контрольное исследование: одну каплю (0,1 мл) изотонического раствора хлористого натрия смешать с маленькой каплей (0,01 мл) исследуемой крови. Реакция агглютинации должна ОТСУТСТВОВАТЬ.

А.Внимательно заполнить все графы бланка – направления в лабораторию для определения группы крови и резус принадлежности с подписью врача.

В. Доставить бланк-направление и пробирку с кровью пациентки в лабораторию для тщательного определения группы крови и резус принадлежности пациентки.

Определение резус-фактора с помощью моноклонального реагента (Цоликлон анти-D Супер)

На тарелку наносят большую каплю реагента (около 0,1 мл). Рядом помещают маленькую каплю (0,01-0,05 мл) исследуемой крови и смешивают кровь с реагентом. Реакция агглютинации начинает развиваться через 10-15 сек, четко выраженная агглютинация наступает через 30-60 сек. (резус положительная, нет агглютинации – резус отрицательная). Результаты реакции учитывают через 3 мин.

Тарелку после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20-30 сек, что позволяет за это время развиться более полной крупнолепестковой агглютинации.

Экспресс-определение групп крови АВО и резус с использованием набора "Эритротест-группокарт"

Набор "Эритротест-группокарт" (ООО "Гематолог", Москва) предназначен для определения АВО и Резус (RhD) групп крови человека в лабораторных и полевых условиях. Определение проводится в реакции прямой гемагглютинации и не требует никаких вспомогательных реактивов и оборудования. В состав набора входят:

• карточка "Эритротест-группокарт";
• пипетка с дозированным объемом капли около 0,02 мл;
• стерильно упакованный скарификатор;
• палочка для смешивания крови с реагентом.

В лунках карточки находятся высушенные моноклональные реагенты анти-А, анти-В, анти-АВ и анти-D, которые немедленно растворяются при добавлении воды. Моноклональные анти-D-антитела специфично выявляют антиген RhD независимо от группы АВО. В последней лунке находится растворитель для постановки контроля на неспецифическую аутоагглютинацию.

Определение производят в нативной крови с консервантом, в крови без консерванта или крови, взятой из пальца.

• Вскрывают упаковку и достают карточку, не дотрагиваясь до лунок с рабочей поверхностью. Вписывают данные пациента, кроме группы крови.
• В каждую лунку вносят 1 каплю воды (водопроводной или дистиллированной), используя вложенную в набор пипетку. Воду наносят на пятно высушенного реагента. Нельзя допускать подсыхания капли.
• Вносят в каждую лунку маленькую каплю исследуемой крови. Кровь наносят рядом с каплей реагента, не касаясь его, чтобы избежать загрязнения одного реагента другим. Для взятия крови из пальца используют стерильный скарификатор.
• Тщательно смешивают кровь с реагентом с помощью палочки, вложенной в набор. В каждой лунке смешивание производят только новой палочкой. Использование одной палочки для перемешивания в разных лунках не допустимо, т. к. ведет к загрязнению реагентов и ошибочному определению группы крови.
• Сразу покачивают пластинку. Четкая агглютинация наступает через 10-30 с, однако окончательный результат следует учитывать через 3 мин, т.к. в случае слабых форм антигена А реакция наступает позднее, а агглютинаты мельче.
• Результат оценивают визуально (табл. 18.6). В квадраты под каждой лункой вписывают результат реакции с соответствующим реагентом (+ или -).

Таблица 18.6. Результаты реакции в наборе "Эритротест-группокарт" и группа крови
Анти-А	Анти-В	Анти-АВ	Анти-О	Группа крови
–	–	–	–	0(I) Rh – отриц.
–	–	–	+	0(I) Rh – полож.
+	–	+	–	А(II) Rh – отриц.
+	–	+	+	А(II) Rh – полож.
–	+	+	–	В(III) Rh – отриц.
–	+	+	+	В(III) Rh – полож.
+	+	+	–	АВ(IV)Rh – отриц.
+	+	+	+	АВ(IV) Rh – полож.

Вписывают группу крови. Заключение о группе крови можно делать только в случае отсутствия реакции в контроле (последняя лунка).

Отрезают по линии лунки с кровью, а карточку сохраняют.

Срок хранения набора "Эритротест-группокарт" – 2 года при температуре 2- 8°С. Допускается хранение в течение 1 года без холодильника, если температура не превышает 25°С. Хранение и использование незапаянных или поврежденных пакетов не допускается.

Групповую принадлежность крови по системе АВО определяют с помощью реакции агглютинации. Используют три способа определения групп крови по системе АВО:

• с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток;

• с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток и стандартных эритроцитов (перекрёстный способ);

• с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

При необходимости определения группы крови в экстренном порядке (при кровотечении необходимо срочное переливание крови) врач стационара определяет группу крови сам (в лаборатории перепроверку выполняют, но постфактум).

1. Определение групп крови с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток

Суть метода в обнаружении в исследуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Для этого используют реакцию агглютинации. Постановку реакции проводят в помещении с хорошим освещением при температуре 15—25С.

Методика проведения реакции

1. Перед началом реакции подписывают тарелку (наносят фамилию и инициалы исследуемого), после чего на неё под соответствующие обозначения наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворотки I, II и III групп в объёме 0,1 мл (капля около 1 см в диаметре). Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп, так как одна из серий может иметь низкую активность и не дать чёткой агглютинации. Всего получается шесть капель, образующих два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: 0(1), А(11), B(III).

2. Кровь для исследования берут из пальца или из вены. Шесть капель исследуемой крови величиной приблизительно с булавочную головку (0,01 мл, маленькая капля) последовательно переносят сухой стеклянной палочкой на пластину в шесть точек, каждую — рядом с каплей стандартной сыворотки (количество исследуемой крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой её смешивают), потом их осторожно с помощью стеклянных палочек с закруглёнными краями перемешивают.

3. После смешивания тарелку периодически покачивают.

Агглютинация начинается в течение первых 10—30 с, наблюдение следует обязательно вести до 5 мин ввиду возможности более поздней агглютинации, например с эритроцитами группы А2(2).

4. В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результат реакции.

Реакция агглютинации может быть положительной или отрицательной. При положительной реакции обычно в течение первых 10— 30 с в смеси появляются видимые невооружённым взглядом мелкие красные зёрнышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие зёрнышки постепенно сливаются в более крупные зёрна, а иногда в хлопья неправильной формы. При этом сыворотка частично или полностью обесцвечивается. Положительная реакция может быть пескообразной или лепестковой.

Определение резус-фактораАнтигенная система резус-фактора

В 1940 г К. Ландштейнер и А. Винер обнаружили в эритроцитах человека совершенно новый антиген, названный ими резус-фактором (Rh). Резус-фактор присутствует в крови 85% людей, а у 15% отсутствует.

Система антигенов резус представлена пятью основными антигенами: D, С, с, Е, е (ранее считали, что их шесть, но позже было доказано, что аллельного гена d не существует). С и с, а также Е и е — аллельные антигены. Каждая из хромосом несёт только три гена из пяти: D, С или с, Е или е.

Наиболее активен из всех антигенов Rh0 (D) — резус-фактор. В зависимости от его наличия или отсутствия кровь людей делят на резус-положительную (Rh+) и резус-отрицательную (Rh-).

Способы определения резус-фактора

Все методы определения резус-фактора делят на способы, применяемые в клинической практике, и лабораторные способы.

Способы определения Rho(D) в клинической практике

Методика проведения реакции. Исследование проводят в центрифужных пробирках объёмом не менее 10 мл. На дно пробирки вносят одну каплю стандартного универсального реагента, представляющего собой антирезусную сыворотку группы AB(IV), разведённую 33% раствором декстрана затем в нее добавляют одну каплю исследуемой крови (или эритроцитов). Круговым вращением пробирки содержимое размазывают по её внутренней поверхности таким образом, чтобы содержимое растеклось по стенкам. Это значительно ускоряет агглютинацию и делает её крупнолепестковой. Агглютинация на стенках пробирки наступаетв течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса антиген-антитело и чёткой агглютинации наблюдать не менее 3 мин. Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2—3 мл физиологического раствора и перемешивают путём однодвукратного перевертывания пробирки (без взбалтывания!).

Наличие агглютинации (крупные хлопья на фоне просветлённой жидкости) указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови

Правило Оттенберга

подвергаются агглютинации только эритроциты переливаемой донорской крови, так как агглютинины вливаемой крови разводятся в сосудистом русле пациента, их титр становится низким и они не в состоянии агглютинировать эритроциты реципиента. По правилу Оттенберга, можно переливать кровь, эритроциты которой не могут быть агглютинированы сывороткой реципиента.

Правило Оттенберга применимо лишь при переливании до 0,5 л донорской крови (!).

Медицинский справочник болезней

Группы крови. Определение группы крови и резус-фактора.

Многочисленными исследованиями было показано, что в крови могут находиться различные белки (агглютиногены и агглютинины), комбинацией (наличием или отсутствием) которых и образуются четыре группы крови.
Каждой группе дано условное обозначение: 0 (I), А (II), В (III), AB (IV).
Установлено, что переливать можно только одногруппную кровь. В исключительных случаях, когда нет одногрупповой крови, а переливание жизненно необходимо, допустимо переливание иногруппной крови. В этих условиях кровь 0 (I) группы можно перелить боль­ным с любой группой крови, а больным, имеющим кровь AB (IV) группы, можно перелить донорскую кровь любой группы.

Поэто­му, прежде чем начинать переливание крови, необходимо точно установить группу крови больного и группу пере­ливаемой крови.

Определение группы крови.

Для определения группы крови пользуются стандарт­ными сыворотками групп 0 (I), А (II), В (III), которые спе­циально готовят в лабораториях станций переливания крови.
На белой тарелке на расстоянии 3—4 см слева на­право ставят цифры I, II, III, обозначающие стандартные сыворотки. Каплю стандартной сыворотки 0(I) группы наносят пипеткой в сектор тарелки, обозначенный циф­рой I; потом второй пипеткой наносят каплю сыворотки А (II) группы под цифрой II; так же берут сыворотку В (III) группы и третьей пипеткой-наносят под цифрой III.

Затем обследуемому укалывают палец и стеклянной палочкой переносят вытекающую кровь в каплю сыворот­ки, находящейся на тарелке, и смешивают до равномер­ного окрашивания. В каждую сыворотку крови переносят новой палочкой. Через 5 мин с момента окрашивания (по часам!) по изменению в смеси определяют группу крови. В той сыворотке, где произойдет агглютинация (склеивание эритроцитов), появляются хорошо видимые красные зернышки и глыбки; в сыворотке, где агглюти­нации не произойдет, капля крови останется гомогенной, равномерно окрашенной в розовый цвет.

В зависимости от группы крови обследуемого агглютинация произойдет в определенных пробах. Если обследуемый имеет 0 (I) группу крови, то склеивания эритроцитов ни с одной сы­вороткой не произойдет.
Если обследуемый имеет А (II) группу крови, то агглютинации не будет только с сыво­роткой группы А (II), а если обследуемый имеет В (III) группу, то агглютинации не будет с сывороткой В (III). Агглютинация наблюдается со всеми сыворотками, если исследуемая кровь будет AB (IV) группы.

Иногда даже при переливании одногруппной крови наблюдаются тяжелые реакции. Проведенные исследования позволили установить, что приблизительно у 15% людей в крови отсутствует особый белок, так назы­ваемый резус-фактор.

Если этим лицам провести повтор­ное переливание крови, содержащей этот фактор, то воз­никнет тяжелое осложнение, называемое резус-конфлик­том, и разовьется шок. Поэтому в настоящее время всем больным обязательно проводят определение резус-фак­тора, так как реципиенту с отрицательным резус-фактором можно переливать только резус-отрицательную кровь.

Ускоренный способ определения ре­зус-принадлежности. На стеклянную чашку Петри наносят 5 капель антирезус-сыворотки той же груп­пы, что и у реципиента. В сыворотку добавляют каплю крови обследуемого и тщательно перемешивают. Чашку Петри помещают на водяную баню при температуре 42— 45°С. Результаты реакции оценивают через 10 мин. Если наступила агглютинация крови, то у обследуемого кровь резус-положительная (Rh+); если агглютинации нет, то исследуемая кровь резус-отрицательная (Rh—).
Разработан ряд других способов определения резус-фактора, в частности с помощью универсального антирезусного реагента D.

Обязательно определение группы крови и резус-принадлежности всем больным, находящимся в стационаре. Результаты исследования должны быть зане­сены в паспорт больного.